خدمت فلوسایتومتری
درباره خدمت:
تکنیک فلوسایتومتری روشی قدرتمند برای شمارش و آنالیز سلول های رنگ آمیزی شده به روش فلورسانس در جمعیت تک سلولی برای شناسایی حضور مولکول آنتی ژن در سطح و یا داخل سلول، به منظور تفسیر وقایع سلولی از جمله فرایندها ، شرایط و ساختارهای داخل سلول مرتبط با عملکرد و فیزیولوژی آن قابل استفاده می باشد. در این تکنیک با نشان دار کردن سلول به کمک فلوروکروم ها در دو حالت غیر مستقیم با واسطه انتی بادی(ها) و یا حالت مستقیم بصورت اتصال بدون واسطه فلوروکروم ها به سلول، قابل شناسایی و اندازه گیری خواهد بود.
کاربردهای مهم تکنیک فلوسایتومتری:
کاربردهای مهم تکنیک فلوسایتومتری:
- ایمونوفنوتایپینگ(Immunophenotypjng): با رنگ آمیزی اختصاصی آنتی ژن ها با کمک آنتی بادی های کونژوگه با مواد فلورسانس، درصد سلول های مثبت و در ضمن میزان نسبی بیان آنتی ژن در بین جمعیت سلولی شناسایی می شود.
- میزان مرگ و میر سلولی(Apoptosis): میزان و درصد آپپتوز و نکروز به کمک رنگ آمیزی Annexin-PI در بین جمعیت سلولی مشخص می شود.
- میزان ماده ژنتیکی در سلول(Cell Cycle): برای بررسی اینکه سلولها در جمعیت سلولی در کدام فاز از چرخه سلولی(G2،S ،G1 و میتوز) است، از این تست استفاده می شود. در این تست رنگ آمیزی محتوای کروماتین سلول به کمک PI یا DAPI انجام می شود.
- بررسی میزان ماده ژنتیکی به همراه ایمونوفنوتایپینگ(Cell Cycle & Immunophenotypjng): بررسی میزان بیان آنتی ژن هدف در بین جمعیت سلولی و این که چه ارتباطی بین بیان آنتی ژن و چرخه تقسیم سلولی و فازهای آن وجود دارد، توسط این تکنیک قابل انجام است.
- بررسی زنده مانی سلول ها (Viability): با استفاده از فلوروکروم هایی که می توانند به ماده ژنتیکی و یا غشای سلول و یا آمین های آزاد موجود در سطح و داخل سلول وجود دارند می توان به زنده مانی و میزان مرگ سلول ها در بین جمعیت سلولی پی برد.
- بررسی میزان تکثیر سلولی (Cell proliferation rate): با تکنیک فلوسایتومتری و رنگ آمیزی CFSE می توان به راحتی میزان تکثیر سلولی را در نسل های مختلف بررسی کرد.
- نمایش اندازه و گرانولیتی سلولها: از ابتدایی ترین قابلیت های دستگاه فلوسایتومتری قابلیت بررسی و نمایش اندازه و میزان گرانولیتی سلول ها نسبت به یکدیگر می باشد.
مفاهیم پایه ای و تکنیکی دستگاه در جهت انجام خدمت
برای انجام فلوسایتومتری، ابتدا باید سلول ها را به صورت تکی در آورده و در محیط مناسب بصورت سوسپانسیون معلق شده باشند. پس از تهیه سوسپانسیون با تعداد مناسب حداقل 200 هزار سلول، سلول ها با آنتی بادی های کونژوگه با مواد فلوروکروم و بر اساس پروتکل مورد نظر نشان دار می شوند. سلول های نشان دار شده پس از شستشو و سانتریفوژ در بافر حاوی 0.5 درصد آلبومین بر روی یخ و در پوشش محافظ در برابر نور به آزمایشگاه فلوسایتومتری منتقل و بعد از resuspend شدن به دستگاه داده می شوند و بر اساس نوع و شدت رنگ، شمارش و ثبت می شوند.
این آزمایشگاه مجهز به یک دستگاه فلوسایتومتری FACSLyric و دو دستگاه فلوسایتومتری PARTEC PAS می باشد.
تجهیزات فلوسایتومتری:
- دستگاه فلوسایتومتری BD FACSLyric مجهز به سه لیزر 488، 640 و 405 نانومتر می باشد. جزییات لیزرها و فیلترهای آن در جدول زیر قابل مشاهده می باشد.
- دو دستگاه فلوسایتومتری partec PAS-II، با دو منبع لیزر آرگون یون 488 نانومتر و لیزر دایود 635 نانومتر و لامپ HBO برای تابش UV.
مشخصات مسئول فنی و کارشناس مسوول و اطلاعات تماس:
- مسئول آزمایشگاه: دکتر ابراهیم میرزادگان، دکتری مهندسی بافت PhD
- کارشناس آزمایشگاه: ژامک پهلوان زاده، کارشناسی ارشد رشته زیست شناسی سلولی و مولکولی
شماره تماس : 02122432020 - داخلی 205
آزمایشگاه فلوسیتومتری در طبقه اول پژوهشگاه ابن سینا واقع در دانشگاه شهید بهشتی قرار دارد.
تقویم کاری شنبه تا چهارشنبه ساعت 16-8
خط مشی تست یا خدمت با تعیین هزینه ها: با توجه به نوع نمونه و شرایط آزمون درخواستی متغیر خواهد بود.
لذا در پاسخ به اولین تماس متقاضی هزینه انجام آزمون اعلام می گردد.
لذا در پاسخ به اولین تماس متقاضی هزینه انجام آزمون اعلام می گردد.
*حداقل 48 ساعت قبل از ارسال نمونه با کارشناس آزمایشگاه هماهنگی صورت پذیرد
ذکر منابع تکمیلی
BD TRAINING & E-LEARNING: https://www.bdbiosciences.com/eu/s/training/e-learning -
BD Spectrum Viewer: https://www.bdbiosciences.com/en-us/applications/research-applications/multicolor-flow-cytometry/product-selection-tools/spectrum-viewer -
Fluorescence Tutorials: https://www.thermofisher.com/nl/en/home/support/tutorials.html -
Thermo Fluorescence SpectraViewer: https://www.thermofisher.com/nl/en/home/life-science/cell-analysis/labeling-chemistry/fluorescence-spectraviewer.html -
