خدمت کشت باکتری‌های بالینی و آزمون آنتی‌باکتریال
درباره خدمت:
آزمايش‌هاي آنتی‌باکتریال می‌تواند برای شناسایی حساسیت باکتری به مواد جدید، جستجوی مواد و داروهای جدید آنتی‌باکتریال مورد استفاده قرار گيرد. استفاده از روش‌های استاندارد و تکنیک‌های صحیح آماده‌سازی تلقیح، اندازه تلقیح، متوسط رشد، شرایط اینکوبه کردن و تعیین نقاط پایانی از عوامل مهم تأثیرگذار در صحت و قابل اعتماد بودن آزمون‌های آنتی‌باکتریال هستند. به ترتیبی که اجازه مقایسه نتایج را به محققان بدهند.
آزمايش‌هاي آنتی‌باکتریال می‌تواند برای شناسایی حساسیت باکتری به مواد جدید، جستجوی مواد و داروهای جدید آنتی‌باکتریال مورد استفاده قرار گيرد. استفاده از روش‌های استاندارد و تکنیک‌های صحیح آماده‌سازی تلقیح، اندازه تلقیح، متوسط رشد، شرایط اینکوبه کردن و تعیین نقاط پایانی از عوامل مهم تأثیرگذار در صحت و قابل اعتماد بودن آزمون‌های آنتی‌باکتریال هستند. به ترتیبی که اجازه مقایسه نتایج را به محققان بدهند.
تعرفه آزمون: با توجه به نوع نمونه و شرایط آزمون درخواستی متغییر خواهد بود لذا در پاسخ به اولین ایمیل متقاضی هزینه آزمون در قالب پیش‌فاکتور اولیه اعلام می‌گردد.
خدمات آنتی‌باکتریال حال حاضر این مرکز به شرح ذیل می‌باشد:
- روش انتشار در آگار، دیسک دیفیوژن (Agar disc diffusion):
در این روش محلول ضد باکتری تهیه می‌شود و بر روی محیط TSA یا MHA ریخته می‌شود. با انتشار تدریجی محلول ضد باکتری به محیط کشت، باکتری‌ها در اطراف از بین رفته و هاله عدم رشد تشکیل می‌شود. این روش برای تعیین داشتن یا نداشتن خاصیت ضدمیکروبی هر ماده‌ای قابل استفاده است.
البته برای هر ماده یا محصولی که برای آن ادعای خاصیت ضدمیکروبی می‌شود روش آماده سازی نمونه متفاوت می باشد. - روش انتشار در حفره آگار (Agar well diffusion):
اين روش به طور گسترده‌ای به منظور بررسی فعالیت ضد میكروبي انواع عصاره‌ها استفاده مي‌شود. در این روش همانند روش disk-diffusion سوسپانسیون میکروبی را در سطح پلیت آگار طوري پخش مي‌نماييم كه به طور یکنواخت تمام سطح پلیت را بپوشاند. سپس یک سوراخ با قطر 6 تا 8 ميلي متر در شرایط استريل از آگار بر مي‌داريم و (حجم 200-100 میلی‌لیتر) از نمونه (عصاره) تهيه شده با غلظت معين را داخل حفره وارد مي‌كنيم. سپس، پلیت آگار را تحت شرايط مناسب بسته به نوع میكروارگانيسم مورد آزمايش انكوبه مي‌كنيم. عامل ضد میكروبي در محيط آگار پخش شده و مانع از رشد سویه میکروبی مورد آزمایش می‌شود. - روش تعیین حداقل غلظت ممانعت کنندگی (Minimum Inhibitory Concentration, MIC):
در این روش ما دارای 10 عدد لوله آزمایش می‌باشیم که در هر لوله 500 میکرو لیتر محیط کشت TSB که قبلاً اتوکلاو شده است قرار دارد. در ابتدا برای رقیق سازی، 500 میکرولیتر از نمونه را به لوله شماره یک اضافه می‌کنیم؛ و لوله شماره یک را به وسیله شیکر کاملاً مخلوط می‌کنیم. از لوله شماره یک 500 میکرولیتر نمونه (نمونه + TSB) را برداشته و به لوله شماره دو اضافه می‌کنیم و به همین ترتیب تا لوله شماره هفت پیش می‌رویم که در نهایت بعد از شیک کردن لوله شماره هفت 500 میکرولیتراز محلول را دور می‌ریزیم. حالا مقداری از سوسپانسیون باکتری که برابر با نیم مک فارلند تهیه کردیم به همه هفت لوله اضافه می‌کنیم که غلظت نهایی باکتری در همه لوله ها حدود 5× 105 CFU/Ml شود. لوله شماره هشت حاوی نمونه + محیطTSB ( لوله شاهد) است و لوله شماره نه حاوی محیط+ TSB باکتری بدون نمونه (کنترل مثبت) است که برای تعیین کدورت رشد باکتری به عنوان کنترل رشد استفاده می‌کنیم. لوله شماره ده که محیط TSB است به عنوان کنترل کدورت نداشتن محیط (کنترل منفی) استفاده می‌کنیم (یعنی باکتری اگر رشد نکند باید به شکل این لوله شفاف باشد). نتیجه MIC بر اساس کدورت محیط کشت و قرائت توسط اسپکتروفتومتر در طول موج 600 نانومتر که نشان دهنده رشد باکتری است بررسی می‌کنیم. - روش تعیین حداقل غلظت کشندکی (Minimum Bactericidal Concentration, MBC):
مهار رشد باکتری همواره به معنی مرگ باکتری نیست. تفاوت اثر باکتریو استاتیک و باکتریو سیدالی یک آنتی‌بیوتیک در رسیدن آنتی بیوتیک به هدف مولکولی است. منظور از MBC، حداقل غلظتی از نمونه است که باکتری را از بین می برد. بعد از تعیینMIC از هر کدام از لوله ها 10 میکرولیتر بر روی محیط کشت TSA یاMHA ریخته می شود این پلیت ها به مدت 24 ساعت در انکوباتور 37 درجه سانتیگراد گذاشته می شوند. نتایج آزمون با شمارش تعدا کلنی‌ها (یک تا ده کلنی) نتیجه گزارش می شود. - روش شمارش باکتری های زنده (Colony-Forming Unit, CFU, cfu or Cfu):
هر کلونی به توده‌ای از باکتری‌ها گفته می‌شود که در نتیجه‌ی رشد یک عدد باکتری اولیه روی محیط جامد ایجاد شده است. بنابراین پس از رشد، می‌توان تعداد کلونی‌ها را برابر با تعداد باکتری‌ها در سوسپانسیون اولیه در نظر گرفت. روش محاسبه cfu بدین ترتیب است که میانگین تعداد کلونی های شمارش شده حداقل دو پلیت را در ضریب رقت بکار رفته ضرب می کنیم. از نمونه رقتی از پلیت برای شمارش تعداد کلونی استفاده می کنیم که تعداد کلونی آن کمتر از 30 و بیشتر 300 کلونی نباشد.
مشخصات مسئول فنی و کارشناس مسوول و اطلاعات تماس:
- مسئول آزمایشگاه: دکتر محمدرضا نژادمقدم
ایمیل: - کارشناس آزمایشگاه: سمیه نجف‌زاده
ایمیل: - شماره تماس : 02122432020 - داخلی 106
آزمایشگاه در طبقه همکف پژوهشگاه ابن سینا در دانشگاه شهید بهشتی واقع شده است
تقویم کاری شنبه تا چهارشنبه ساعت 16-8خط مشی تست یا خدمت با تعیین هزینه ها: با توجه به نوع نمونه و شرایط آزمون درخواستی متغیر خواهد بود.
لذا در پاسخ به اولین تماس متقاضی هزینه انجام آزمون اعلام می گردد.
*حداقل 48 ساعت قبل از ارسال نمونه با کارشناس آزمایشگاه هماهنگی صورت پذیرد
