کشت باکتری‌های بالینی و آزمون آنتی‌باکتریال

لیست خدمات و دستگاه ها

خدمت کشت باکتری‌های بالینی و آزمون آنتی‌باکتریال

درباره خدمت:

آزمايش‌هاي آنتی‌باکتریال می‌تواند برای شناسایی حساسیت باکتری به مواد جدید، جستجوی مواد و داروهای جدید آنتی‌باکتریال مورد استفاده قرار گيرد. استفاده از روش‌های استاندارد و تکنیک‌های صحیح آماده‌سازی تلقیح، اندازه تلقیح، متوسط رشد، شرایط اینکوبه کردن و تعیین نقاط پایانی از عوامل مهم تأثیرگذار در صحت و قابل اعتماد بودن آزمون‌های آنتی‌باکتریال هستند. به ترتیبی که اجازه مقایسه نتایج را به محققان بدهند.

مشخصات مسئول فنی و کارشناس مسوول و اطلاعات تماس:

  • مسئول فنی: دکتر محمدرضا نژادمقدم
    ایمیل: moghaddam [AT] avicenna [DOT] ac [DOT] ir 
  • کارشناسان آزمایشگاه: سمیه نجف‌زاده
    ایمیل: n [DOT] najafzadeh [AT] avicenna [DOT] ac [DOT] ir

آزمایشگاه در طبقه همکف پژوهشگاه ابن سینا در دانشگاه شهید بهشتی واقع شده است
تقویم کاری شنبه تا چهارشنبه ساعت 16-8

تعرفه آزمون: با توجه به نوع نمونه و شرایط آزمون درخواستی متغییر خواهد بود لذا در پاسخ به اولین ایمیل متقاضی هزینه آزمون در قالب پیش‌فاکتور اولیه اعلام می‌گردد

خدمات آنتی‌باکتریال حال حاضر این مرکز به شرح ذیل می‌باشد:

  1. روش انتشار در آگار، دیسک دیفیوژن (Agar disc diffusion):
    در این روش محلول ضد باکتری تهیه می‌شود و بر روی محیط TSA یا MHA ریخته می‌شود با انتشار تدریجی محلول ضد باکتری به محیط کشت، باکتری‌ها در اطراف از بین رفته و هاله عدم رشد تشکیل می‌شود. این روش برای تعیین داشتن یا نداشتن خاصیت ضدمیکروبی هر ماده‌ای قابل استفاده است.
    البته برای هر ماده یا محصولی که برای آن ادعای خاصیت ضدمیکروبی می‌شود روش آماده سازی نمونه متفاوت می باشد.
  2. روش انتشار در حفره آگار (Agar well diffusion):
    اين روش به طور گسترده‌ای به منظور بررسی فعالیت ضد میكروبي انواع عصاره‌ها استفاده مي‌شود. در این روش همانند روش disk-diffusion  سوسپانسیون میکروبی را در سطح پلیت آگار طوري پخش مي‌نماييم كه به طور یکنواخت تمام سطح پلیت را بپوشاند. سپس یک سوراخ با قطر 6 تا 8 ميلي متر در شرایط استريل از آگار بر مي‌داريم و یک مقداری (حجم 200-100 میلی‌لیتر) از نمونه(عصاره) تهيه شده با غلظت معين داخل حفره وارد مي‌كنيم. سپس، پلیت آگار را تحت شرايط مناسب بسته به نوع میكروارگانيسم مورد آزمايش انكوبه مي‌كنيم.  عامل ضد میكروبي در محيط آگار پخش شده و مانع از رشد سویه میکروبی مورد آزمایش می‌شود.
  3. روش تعیین حداقل غلظت ممانعت کنندگی (Minimum Inhibitory Concentration, MIC):
    در این روش ما دارای 10 عدد لوله آزمایش می‌باشیم که در هر لوله 500 میکرو لیتر محیط کشت TSB  که قبلاً اتوکلاو شده ‌است قرار دارد. در ابتدا برای رقیق سازی در مقدار 500 میکرو لیتر از نمونه را به لوله شماره یک اضافه می‌کنیم؛ و لوله شماره یک را به وسیله شیکر کاملاً مخلوط می‌کنیم. از لوله شماره یک 500 میکرولیتر نمونه (نمونه + TSB) را برداشته و به لوله شماره دو اضافه می‌کنیم و به همین ترتیب تا لوله شماره هفت پیش می‌رویم که در نهایت بعد از شیک کردن لوله شماره هفت 500 میکرولیتراز محلول را دور می‌ریزیم. حالا مقداری  از سوسپانسیون باکتری که برابر با نیم مک فارلند تهیه کردیم به همه هفت لوله اضافه می‌کنیم که غلظت نهایی باکتری در همه لوله ها حدود 5× 105 CFU/Ml  شود. لوله شماره هشت که حاوی نمونه + محیطTSB  ( لوله شاهد) است و لوله شماره نه حاوی محیط TSB+ باکتری بدون نمونه (کنترل مثبت) که برای تعیین کدورت رشد باکتری را نیز به عنوان کنترل رشد استفاده می‌کنیم. لوله شماره ده که محیط TSB  است به عنوان کنترل کدورت نداشتن محیط (کنترل منفی) استفاده می‌کنیم (یعنی باکتری اگر رشد نکند باید به شکل این لوله شفاف باشد). نتیجه MIC بر اساس کدورت محیط کشت و قرائت توسط اسپکتروفتومتر در طول موج 600 نانومتر که نشان دهنده رشد باکتری است بررسی می‌کنیم.
  4. روش تعیین حداقل غلضت کشندکی (Minimum Bactericidal Concentration, MBC):
    مهار رشد باکتری همواره به معنی مرگ باکتری نیست. تفاوت اثر باکتریو استاتیک و باکتریو سیدالی یک آنتی‌بیوتیک در رسیدن آنتی بیوتیک به هدف مولکولی است. منظور از MBC، حداقل غلظتی از نمونه است که باکتری را از بین می برد. بعد از تعیینMIC   از هر کدام  از لوله ها 10 میکرولیتر  بر روی محیط کشت TSA یاMHA  ریخته می شود این پلیت ها به مدت 24 ساعت در انکوباتور 37 درجه سانتیگراد گذاشته می شوند. نتایج آزمون با شمارش تعدا کلنی‌ها (یک تا ده کلنی) نتیجه گزارش می شود.
  5. روش شمارش باکتری های زنده (Colony-Forming Unit, CFU, cfu or Cfu):
    هر کلونی به توده‌ای از باکتری‌ها گفته می‌شود که در نتیجه‌ی رشد یک عدد باکتری اولیه روی محیط جامد ایجاد شده است. بنابراین پس از رشد، می‌توان تعداد کلونی‌ها را برابر با تعداد باکتری‌ها در سوسپانسیون اولیه در نظر گرفت. روش محاسبه cfu  بدین ترتیب است که میانگین تعداد کلونی های شمارش شده حداقل دو پلیت را در ضریب رقت بکار رفته ضرب می کنیم. از نمونه رقتی از پلیت برای شمارش تعداد کلنی استفاده می کنیم که تعداد کلونی آن کمتر از 30 و بیشتر 300 کلونی نباشد.




راهنمای استفاده از دستگاه


پژوهشگاه فناوری های نوین علوم زیستی جهاد دانشگاهی - ابن سینا با هدف دستیابی به دانش فنی در زمینه فناوری‌های نوین زیستی از طریق انجام طرح‌های مطالعاتی و پژوهشی آزمایشگاهی و بالینی، از سال ۱۳۷۷ فعالیت خود را آغاز کرد.

آخرین مطالب بلاگ

دستاوردهای آموزشی

دستاوردهای آموزشی

دستاوردهای آموزشی اخذ موافقت بوردهای تخصصی و هیأت...

دستاوردهای درمانی

دستاوردهای درمانی

دستاوردهای درمانی راه اندازی نخستین کلینیک فوق تخ...

دستاوردهای پژوهشی

دستاوردهای پژوهشی

دستاوردهای پژوهشی ارایه 822 مقاله داخلی و خارجی ا...

تولیدات

تولیدات

دستاوردهای تولیدی تولید موفقیت آمیز انواع آنتی با...

سایر

سایر

سایر دستاوردها 1-احداث پروژه عمرانی مجتمع تحقیقات...

عضویت ها

عضویت ها

عضویت پژوهشگاه در شبکه های تحقیقاتی کشور شبکه سرط...

گالری تصاویر

آمار سایت

We have 181 guests and no members online

نماد الکترونیکی

جستجو

main Menu EN